細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)生長？！

是細(xì)胞污染了還是正常現(xiàn)象？

是消化不好了還是鋪板有問題？

抱團(tuán)細(xì)胞越來越多，怎么樣才能讓細(xì)胞分開生長？

請(qǐng)認(rèn)真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！

細(xì)胞抱團(tuán)一定代表細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？

▲RAW264.7細(xì)胞-正常狀態(tài)

▲RAW264.7細(xì)胞-異常狀態(tài)

▲H9c2細(xì)胞-正常狀態(tài)

▲H9c2細(xì)胞-異常狀態(tài)

3、細(xì)胞抱團(tuán)是因?yàn)榧?xì)胞污染了嗎？一般細(xì)胞培養(yǎng)液清亮，就不是污染。如果是污染了的話，可以通過觀察培養(yǎng)液顏色，若污染，則很渾濁。

細(xì)胞為啥總是喜歡抱團(tuán)？

• 細(xì)胞死亡釋放出DNA，纏繞其他細(xì)胞，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)（消化的過程可能過于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太強(qiáng)或有毒性等）。

• 細(xì)胞離心速度過大或時(shí)間太長。

• 消化不*的時(shí)候，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開；消化過度的時(shí)候，圓形的細(xì)胞容易聚堆，再分開很困難！

• 狀態(tài)不好、老化的細(xì)胞，也可能會(huì)出現(xiàn)抱團(tuán)生長的情況（比如換液不及時(shí)、長的太滿才傳代、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài)差）。

• 傳代時(shí)沒有吹打均勻，細(xì)胞團(tuán)多，培養(yǎng)時(shí)就會(huì)是一團(tuán)一團(tuán)的。

• 傳代后細(xì)胞鋪板不均勻。

• 有可能是雜細(xì)胞，或者死細(xì)胞。

• 細(xì)胞未消化開。

• 非震蕩培養(yǎng)或細(xì)胞量過多的話就會(huì)成團(tuán)。

如何避免細(xì)胞抱團(tuán)？

• 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。

• 對(duì)于貼壁非常牢固的細(xì)胞（如MDCK），為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，建議分多批多次消化，這樣才能最大限度地降低胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠*。

• 細(xì)胞生長密度不要太高，70%－80％就好（細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞，沒有出現(xiàn)堆疊生長），這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了。如果細(xì)胞已經(jīng)長成集落，可先將細(xì)胞低密度傳代，第二天再消化傳代，這樣連續(xù)傳三次，細(xì)胞抱團(tuán)就會(huì)越來越小，這樣幾代過后，再按照常規(guī)消化方法和時(shí)間能將細(xì)胞逐漸傳成單個(gè)的。

• 消化過程中最好不要使勁搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，這樣細(xì)胞特別容易成屑樣脫落。細(xì)胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(gè)（因?yàn)榧?xì)胞沒有受力點(diǎn)了，所以細(xì)胞很難分散開）。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開，嚴(yán)格控制好消化程度。

• 消化過程需要使用槍頭輕輕吹打，切忌使勁拍培養(yǎng)瓶的側(cè)壁。拍瓶子想要將細(xì)胞拍散的力度對(duì)于細(xì)胞來說相當(dāng)于大地震，細(xì)胞本身是無法承受如此振蕩的。

細(xì)胞抱團(tuán)了，要如何處理？