這篇文章Kaustubh Kishor Jadhav撰寫的，今天接著把續(xù)集寫完，劃重點，續(xù)集真的很重要，因為都是滿滿告訴您怎么對付和清除支原體的干貨。

避免支原體感染的最好和最重要的方法是為實驗室工作人員提供適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)和指導(dǎo)。這可以通過培訓(xùn)合格的員工進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，從而消除污染的原因之一。如果可能的話，應(yīng)該為細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞系的維持提供一個單獨(dú)的實驗室。為實驗室提供這樣的環(huán)境不僅可以減少支原體，而且可以避免其他細(xì)菌和真菌污染。

合適的個人防護(hù)用品很重要

由于人類是污染的主要來源，預(yù)防步驟從你開始。如果你足夠小心地為工作提供一個無菌的環(huán)境，它很快就會在你意識到之前成為一種習(xí)慣。這里有一些事情要做： 

1.在處理細(xì)胞系時，穿上干凈的實驗服和面罩。

2.避免與其他實驗室成員討論，在實驗室打噴嚏或咳嗽。人類口腔中含有多種支原體，當(dāng)你說話、大笑、打噴嚏或咳嗽時，這些支原體會進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)。

3.工作時戴手套，使用后丟棄。在沒有手套或口罩的情況下工作時，人與人接觸會傳播污染。一定要定期更換手套和口罩，而不是把它們放在實驗服的口袋里。

4.為實驗室準(zhǔn)備單獨(dú)的鞋子，以避免帶入環(huán)境污染物。

細(xì)胞系和試劑

5.使用前檢查你的細(xì)胞株有無支原體污染。

6.確保用于繼代培養(yǎng)的血清中沒有污染。避免使用存放時間較長的過期產(chǎn)品或試劑。

7.盡可能使用新鮮培養(yǎng)基和密封緊密的試劑耗材。

8.使用一次性移液管以避免交叉污染。

9.在工作之前和工作期間，確保將所有必需的設(shè)備和試劑放在層流氣流中。

10.在使用細(xì)胞系進(jìn)行化驗或分析之前，進(jìn)行支原體污染的常規(guī)檢查。

11.使用0.1微米的過濾器，因為他們是一個更好的方式避免支原體，而不是使用0.2微米的過濾器，為媒體過濾。雖然不能100分之100保證這個過程可以避免污染，但這是一個很好的預(yù)防措施。

12.準(zhǔn)備少量用于實驗的培養(yǎng)基，防止其他培養(yǎng)基受到污染。

13.避免細(xì)胞培養(yǎng)物長時間暴露在空氣中，并確保在將其放入培養(yǎng)箱之前擰緊瓶蓋。這也將解決通過氣溶膠污染的問題。

14.在不使用抗生素的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，因為使用抗生素會使支原體對抗生素產(chǎn)生耐藥性?？股刂荒苡糜谌コгw，不能用于防止支原體生長。此外，長時間使用某種抗生素會導(dǎo)致除支原體外的其他細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。

15.即使冷凍保存細(xì)胞的存活率隨著每一次繼代培養(yǎng)而降低，也要始終以冷凍保存的小瓶的形式保存細(xì)胞系。

定期對層流設(shè)備和實驗室設(shè)備進(jìn)行熏蒸

用于維持細(xì)胞系的CO2培養(yǎng)箱不得過度擁擠（填充量不得超過其容量的60%），否則會導(dǎo)致支原體從一個細(xì)胞系感染到另一個細(xì)胞系。

多個細(xì)胞系不應(yīng)存放在一個培養(yǎng)箱中，因為它會增加交叉污染的風(fēng)險。

應(yīng)定期清潔CO2培養(yǎng)箱，避免任何形式的潮濕。為保持濕度而提供的蒸餾水應(yīng)該定期更換，因為支原體、細(xì)菌和真菌可以在這些容器中居住。

立即清理所有溢出的培養(yǎng)基和試劑。

水浴、液氮容器、試劑瓶和其他傳染源必須定期清潔，并定期檢查是否有污染。

那么你發(fā)現(xiàn)了支原體污染，接下來怎么辦？最（嘬）好的方法是丟棄被感染的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。在文化不可替代或非常昂貴的情況下，有一些方法可以拯救文化。

消除是一個非常耗時的過程，并增加了對其他健康細(xì)胞系的二次污染風(fēng)險。支原體清除劑（MRA）是喹諾酮類抗生素的衍生物，是廣譜抗生素。這些試劑可以用來清洗細(xì)胞培養(yǎng)物。根據(jù)感染的嚴(yán)重程度，治療可能需要幾周到幾個月。漿細(xì)胞素是一種廣泛應(yīng)用的藥物，可以清除培養(yǎng)基中存在的大多數(shù)支原體。此外，諸如BM-Cyclin、氟喹諾酮類環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星、zagam、baytril、四環(huán)素等藥物可用于從感染培養(yǎng)物中去除支原體。

MRAs無毒，能有效去除大部分支原體污染，使用方便，對多種支原體有效。這些方法不能保證*去除支原體，但可以去除大部分支原體污染，是最后的選擇。考慮到這種治療的持續(xù)時間會影響細(xì)胞的生長和活力，因此存在一些缺點。如果支原體對細(xì)胞培養(yǎng)造成了永（詠）久性的損害，那是不可修復(fù)的。一些細(xì)胞可能會由于較長的潛伏期而死亡，并影響細(xì)胞的總活力。