當(dāng)在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行單懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，樣本中出現(xiàn)細(xì)胞丟失的情況并不少見(jiàn)。當(dāng)細(xì)胞破裂時(shí)，它們會(huì)釋放DNA和碎片，導(dǎo)致細(xì)胞聚集成大團(tuán)塊，使其難以擴(kuò)張。細(xì)胞聚團(tuán)既可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，也可引起細(xì)胞死亡。

隨著更多的細(xì)胞死亡并釋放碎片，問(wèn)題將繼續(xù)惡化。盡可能快地處理或避免細(xì)胞聚團(tuán)將有利于實(shí)驗(yàn)的后續(xù)結(jié)果。

為什么細(xì)胞聚團(tuán)是個(gè)問(wèn)題？

單細(xì)胞懸浮培養(yǎng)基的目標(biāo)是為靶細(xì)胞提供盡可能多的生長(zhǎng)資源。這包括充足的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)和充足的繁殖空間。當(dāng)細(xì)胞聚集在一起時(shí)，它們會(huì)相互限制，降低細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)吞吐量，最終影響生長(zhǎng)結(jié)果。

細(xì)胞聚團(tuán)也會(huì)導(dǎo)致靶細(xì)胞的回收率降低，并且會(huì)干擾標(biāo)記，這也是懸浮細(xì)胞標(biāo)記的成功率不高的原因，某些細(xì)胞分析方法，如流式細(xì)胞術(shù)，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆蛛x。在流式細(xì)胞術(shù)中，大量細(xì)胞以快速的液流通過(guò)機(jī)器。這臺(tái)被稱為細(xì)胞儀的機(jī)器檢測(cè)不同細(xì)胞之間物理特性的差異，并使用熒光燈對(duì)它們進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)記。如果細(xì)胞通過(guò)試管時(shí)聚集在一起，細(xì)胞儀將很難準(zhǔn)確測(cè)量它們的特性。這會(huì)導(dǎo)致它們被不正確地分類，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響。

細(xì)胞聚團(tuán)的原因

防止細(xì)胞聚團(tuán)的最佳方法之一是了解是什么導(dǎo)致了細(xì)胞聚集，并采取預(yù)防措施避免這些事件的發(fā)生。培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括： 

1.過(guò)度消化-某些用于組織分解的酶，如胰蛋白酶，如果過(guò)量使用會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)塊

2.環(huán)境壓力-物理壓力和反復(fù)的溫度變化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，從而導(dǎo)致細(xì)胞的“粘性"的DNA分子將相鄰的細(xì)胞連接在一起

3.組織分解-在制備單細(xì)胞懸浮液時(shí)，使用酶、機(jī)械或化學(xué)分解策略可使細(xì)胞破裂，從而導(dǎo)致碎片的聚團(tuán)。 

4.過(guò)度生長(zhǎng)-當(dāng)細(xì)胞在其培養(yǎng)基中密度過(guò)大的時(shí)候，細(xì)胞將開始溶解并釋放碎片，碎片中的粘性因子會(huì)將細(xì)胞聚集到一起

5.污染-某些細(xì)菌和真菌病原體導(dǎo)致細(xì)胞溶解；結(jié)塊通常是細(xì)胞培養(yǎng)物被污染的跡象

6.雖然其中一些是由于實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤而發(fā)生的，但實(shí)際也有部分的細(xì)胞具有天生的聚團(tuán)現(xiàn)象，比如大部分的半懸浮細(xì)胞，BV-2 ,NCI-H716等等，半懸浮細(xì)胞一般在在整體匯合度70%左右就要進(jìn)行傳代操作了，這樣可以降低細(xì)胞聚成大團(tuán)塊的風(fēng)險(xiǎn)。

怎么減少細(xì)胞聚團(tuán)？

1. 在開始實(shí)驗(yàn)之前，可以采取一些措施來(lái)防止細(xì)胞聚集。例如，一種名為DNA酶I的內(nèi)切酶可以混合到培養(yǎng)基中，從破裂的細(xì)胞中分離DNA。分解這些多余的碎片有助于保持靶細(xì)胞生長(zhǎng)的空間。然而，dna酶I使用過(guò)多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞突變，最終會(huì)影響您的實(shí)驗(yàn)效果，所以實(shí)在不是逼不得已，不建議使用。

2. 通過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用，也可以減少結(jié)塊。如果使用離心機(jī)分離或混合樣品，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團(tuán)，通常情況下，較快的速度可以離心散細(xì)胞，但在高速下也必須考慮細(xì)胞的脆弱性，所以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)離心的時(shí)間也不失為一種穩(wěn)靠的離心散懸浮聚團(tuán)細(xì)胞的方法

3.還有一些方法可以分離細(xì)胞，這些細(xì)胞聚集在一起，不會(huì)造成過(guò)度的傷害。某些叫做螯合劑的化學(xué)物質(zhì)與正電荷離子有親和力。根據(jù)細(xì)胞聚團(tuán)的性質(zhì)，可以添加螯合劑來(lái)溶解它們之間的粘連，而不會(huì)傷害細(xì)胞。乙二胺四乙酸（EDTA）是一種螯合劑，常用于溶解鈣粘連。 

4.另一種細(xì)胞清除方法是氚化。氚化過(guò)程涉及到溫和、重復(fù)的吸管，以打破細(xì)胞間的弱粘連。